我們知道,ELISA 測定中影響要素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢驗中除正常反響外,有時??梢姷揭恍╁e誤結(jié)果(即假陽性或假陰性),那么致使試驗不成功的主要原因有哪些咧?
標本的影響:溶血標本及混有紅細胞的血清選用ELISA法檢測易發(fā)生假陽性?;蛟S是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗刷過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,發(fā)生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。
第二,標本受細菌污染:因菌體中或許含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因而,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測定結(jié)果。
第三,標本保存不妥:在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、構(gòu)成假陽性;為克服上述攪擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮收集;如不能當即測定,5d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不行激烈振動。
第四,標本凝結(jié)不全:在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝結(jié)時即強行離心別離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在 ELISA 測定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊,易構(gòu)成假陽性結(jié)果;因而血液標本收集后有必要使其充分凝結(jié)后再別離血清。