晶抗生物為您詳細(xì)介紹moc1/moc2小鼠口腔鱗狀細(xì)胞癌/雌性注意事項(xiàng)
基本信息
細(xì)胞名稱:moc1/moc2小鼠口腔鱗狀細(xì)胞癌
細(xì)胞品系:C57BL/6 Cxcr3-/-
細(xì)胞來源:國外
細(xì)胞鑒定:STR鑒定已通過
細(xì)胞形態(tài):淋巴母多角形細(xì)胞樣,貼壁+懸浮生長
培 養(yǎng) 基:DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)(BasMed-AW-013)+FBS 10% + P/S1%500ML培養(yǎng)基:IMDM:F10/F12=2:1313ml:157ml培養(yǎng)基+FBS10%(50ml)+2.5mg/500ml胰島素+20ug/500ml+2.5ug/500ml EGF+ P/S 1% 雙抗,1%。
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
細(xì)胞背景:口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)是頭頸癌的一個突出子集,頭頸癌是六大常見癌癥。發(fā)生OSCC的主要危險因素是致癌物暴露,將頭頸癌的這一亞群與人瘤病毒誘導(dǎo)的頭頸癌區(qū)分開來。盡管在檢測、手術(shù)、化療和放療方面取得了進(jìn)展,但OSCC的預(yù)后幾十年來一直保持穩(wěn)定。此外,在診斷時,大約三分之二的OSCC患者患有局部晚期疾病,導(dǎo)致發(fā)病率和死亡率增加。
細(xì)胞用途:僅供科研使用
注意事項(xiàng)
1. MOC1細(xì)胞活性特別高,增值速度非??欤唤ㄗh傳代密度太大,而選擇稀一點(diǎn)重鋪,等長滿80%左右傳代的時候,很難消化下來,建議加入0.25%EDTA的進(jìn)去后充分混勻所有細(xì)胞都接觸到,放置到培養(yǎng)箱進(jìn)行消化,時長大約是3-4分鐘左右后拿出來
2. 在培養(yǎng)器皿的側(cè)邊進(jìn)行拍打幫助細(xì)胞脫落,拍打過程大約持續(xù)2分鐘左右才會脫落大部分細(xì)胞,如果脫落比例還不是很多,也可以重新放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化1-2分鐘后再次拿出來進(jìn)行拍打脫落,等80-90%細(xì)胞都脫落后再終止消化,離心重懸再重新鋪瓶,分散均勻。
3. MOC2細(xì)胞貼壁性和常規(guī)細(xì)胞類似沒有特別牢固。倍增周期也沒有MOC1快。采用常規(guī)消化方法處理。
常溫發(fā)貨
收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-3小時后觀察密度和狀態(tài)拍照2-3張反饋給銷售,密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例1:2,等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成1個1ml凍存管,另外一瓶繼續(xù)傳代,反復(fù)凍存2-3只后才擴(kuò)增做實(shí)驗(yàn),以防突發(fā)情況引起斷種。
干冰發(fā)貨常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管2只,復(fù)蘇1只,另外一只備用,第一個復(fù)蘇不成功時嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個,均沒有復(fù)蘇成功的情況即時留存復(fù)蘇照片通知我們。
貼壁細(xì)胞
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
4. 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
5. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。
懸浮細(xì)胞
懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞,可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài),一般情況下細(xì)胞密度維持在1×10?~1×10?個/mL(不同細(xì)胞對密度要求不同)可以維持細(xì)胞的正常生長。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行。
生物安全
1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)
面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。
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