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傳代細(xì)胞操作步驟:
1)吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。
2)向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許,以能覆滿瓶底為限。
3)置溫箱中2~5分鐘,當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮,Bv-2細(xì)胞, 小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞間隙增大后,立即終止消化。
4)吸除消化液,向瓶?jī)?nèi)注入Hanks液數(shù)毫升,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶,把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細(xì)胞時(shí),動(dòng)作要輕,以免把已松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失,如用胰蛋白酶液?jiǎn)为?dú)消化,吸除胰蛋白酶液小鼠ELISA試劑盒后,可不用Hanks液沖洗,直接加入培養(yǎng)液。
5)用吸管吸取營(yíng)養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞,使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。
6)計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后,把細(xì)胞懸液分成等份分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶中,置溫箱中培養(yǎng)。
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